鼠疫菌V抗原的单抗系统建立和免疫学定量检测
目的：制造鼠疫菌V抗原的鼠单克隆抗体，经抗体表位分析建立单抗系统，并通过此单抗系统建立免疫学检测鼠疫菌V抗原含量的方法，进行鼠疫疫苗研制中V抗原的质量控制。 方法：用鼠疫菌V抗原免疫雌性BALB/c小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经筛选和克隆化培养，获得多株分泌V抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞，用各株细胞制造小鼠腹水得到单抗，用辣根过氧化物酶进行标记，经组位抑制法进行表位分析，检测单抗的特异性。通过将针对各表位的单抗进行组合配对优化模式的分析，建立双抗体夹心ELISA测定V抗原含量的方法，并验证了方法的专属性、准确性、精密度和线性范围。 结果：得到四株鼠疫菌v抗原单克隆抗体，Western blot表明单抗均识别参考抗原制品中相对分子量36 kD的V抗原蛋白，这些单抗分为针对三个不同V抗原表位;筛选其中两株单抗建立的双抗体夹心ELISA法检测V抗原含量具有较高的特异性和相关性，灵敏度最低检测值为10ng/ml。 结论：建立了鼠疫菌V抗原的单抗系统和双抗体夹心ELISA免疫学定量检测方法。建立实验室参比品。以抗原和单抗参考制品及测定标准曲线可进行疫苗质量控制，同时也适用于其它鼠疫研究。
鼠疫 耶尔森菌 单克隆抗体 双抗体夹心 免疫学检测
常娅莉 惠一明 王秉翔 焦磊 胡丽娜 傅林锋 王革 卜培英 裴明玉 万艳 韩少波
兰州生物制品研究所，兰州 730046
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130-135
2009-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）