基因芯片分型中荧光标记(Cy3)引物的多重PCR及其优化
目的：为了降低检测成本以及提高芯片分型的效率，充分体现芯片技术高通量平行检测的优势，本研究探索了适于基因芯片分型的荧光标记引物多重扩增方法。 方法：选取药物代谢酶CYP450在中国人群中的八个热点突变，采用荧光标记引物扩增和芯片杂交检测的办法进行分型。分别对影响PCR的多个关键因素如体系中Mg2+浓度、dNTPs的加入量、循环次数、退火温度、模板DNA总量和Taq DNA聚合酶等环节进行系列调整，并结合杂交液浓度及混合比例的优化来调整目的片段的扩增，获得理想的杂交检测信号。 结果：在合理设计多对扩增引物的前提下，DNA浓度40ng/uL，Mg2+浓度2mM，四种dNTPs分别为200uM，0.5U的Taq.DNA聚合酶的体系中，八个位点在三组多重PCR中得以扩增，通过不同引物对的合理组合及引物浓度调节，取得了适于芯片分型的多重扩增产物。 结论：由于Cy3的位阻效应，荧光标记引物的多重PCR的效率低于一般反应。在影响PCR的诸因素中，反应体系的浓度之间的优化组合对于获得高特异性的扩增产物至关重要，然而相同的扩增效率并不意味着一致的杂交结果，同扩增体系内应通过观察杂交信号的强度来调整不同引物的量，使产物量高低有别而杂交信号接近，合理调整被扩增片段组合和优化关键反应条件可以获得理想结果。
荧光标记引物 多重PCR DNA芯片 基因芯片分型 优化分析
李健 文思远 乔平 杨丽 石岗 张敏丽 王升启
解放军总医院 100853 军事医学科学院放射医学研究所 100850
国内会议
承德
中文
242-249
2006-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）