融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用

摘要：

本研究通过融合表达Rv3872、CFP-10和ESAT-6，以改良牛结核病特异性鉴别诊断抗原CFP-10-ESAT-6，提高牛结核抗体鉴别诊断法的灵敏度。利用PCR方法，克隆牛分枝杆菌RD1区上述三个基因，通过酶切连接方法，将三个基冈串联在pET-28a载体上，基因之间用Linker序列连接。融合基因在大肠杆菌内经IPTG 0.4mmol L-1诱导3h，目的蛋白经SDS.PAGE证实表达在上清中，Western-blot分析证实表达蛋白具有免疫原性。以所表达的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA，检测了44份牛分枝杆菌感染背景清楚的临床奶牛血清。26份阳性血清中，Rv3872一CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA检出阳性样本18份，检测灵敏度为69％，而CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA只检出阳性样本4份。18份阴性血清中，两种ELISA均检出17份阴性血清，特异性都为94(17/18)。因此，Rv3872-CFP-10一ESAT-6融合蛋白在对牛结核抗体检测特异性没有降低的情况下，敏感性获得了显著提高，这对牛结核病的早期鉴别诊断方法的建立具有重要意义。

关键词： 牛结核 融合蛋白 鉴别诊断 抗体检测

作者: 刘冬光 廖娟红 于清龙 陈颖钰 陈焕春 郭爱珍

作者单位: 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北 武汉 430070 华中农业大学动物医学院,湖北 武汉 430070

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会

会议地点: 武汉

会议语种:中文

页码: 309-315

在线出版日期: 2009-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）