奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析

摘要：

提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA，应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上，测序结果表明，扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列，与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100％。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上，并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在，表达量约占细菌总蛋白的40％。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化，并利用VSV—MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛β-干扰素抗病毒活性分别约3.16×105U/mL，7.5×104U/mL。结果表明重组奶牛β-干扰素特异性好，而且抗病毒活性比较稳定。本研究为研制和开发重组奶牛β-干扰素类生物制品研发奠定了基础。

关键词： 奶牛 β-干扰素 融合蛋白 抗病毒活性 植物血凝素

作者: 刘颖 刘华兰 杨利国 陈焕春 郭爱珍

作者单位: 湖北省华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,湖北 武汉 430070 湖北省华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室,湖北 武汉 430070 湖北省华中农业大学动物科技学院,湖北 武汉 430070

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛/肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会

会议地点: 武汉

会议语种:中文

页码: 383-390

在线出版日期: 2009-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）