大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)腺病毒基因转染系统的构建及鉴定

摘要：

目的:构建携带大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)的重组腺病毒载体.为后续的基因转染研究做准备。 方法:采用RT—PCR扩增的方法获取鼠源性的VEGF,并克隆入穿梭质粒pDC316.新构建的质粒pDC316-VEGF经酶切及测序鉴定正确后.通过Lipofectamine2000的介导与腺病毒包装质粒pBHGE3共转染至人胚肾细胞HEK293.经同源重组后获得携带鼠VEGF的重组腺病毒，VDC316-VEGF。应用PCR鉴定重组腺病毒，空斑传代纯化病毒.反复冻融扩增病毒.50％组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度。 结果:PCR鉴定证实重组腺病毒含有鼠VEOF.病毒滴度为3×109pfu／ml. 结论:携带大鼠VEGF的重组腺病毒载体构建成功.该载体可在HEK293细胞内扩增获得足够高的病毒滴度.可作为后续基因治疗研究工作中可靠的基因转染工具。

关键词： 血管内皮细胞生长因子 腺病毒载体 基因转染系统 PCR鉴定 基因治疗

作者: 杨宏宇 章希炜 陈国玉

作者单位: 南京医科大学第一附属医院血管外科,210029,南京

会议类型: 国内会议

会议名称: 2009中国血管和腔内血管外科论坛暨第七届北京协和医院血管外科研讨会

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 93-96

在线出版日期: 2009-05-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）