结核分枝杆菌Rv2031c基因的表达、纯化和鉴定
目的：克隆结核分枝杆菌Rv2031c基因，构建其原核表达载体，并进行表达、纯化及鉴定。采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv2031c基因片段。克隆入pMD18-T载体，序列测定正确后亚克隆入原核表达载体pPro—EXHTb，转化人E.Coli DH5 α，经IPTC诱导表达，SDS—PAGE分析后与抗His单抗进行Western—blot，以Ni—NTA亲和层析纯化目的蛋白。PCR扩增获得的目的基因为435bp，与预期大小一致，测序与Genbank公布的基因序列完全一致。成功构建原核表达载体pPro—EXHTb-2031c，转化E.Coli DH5 α后能特异性表达目的蛋白，大小约20KD，与理论值相一致。蛋白可溶性分析表明该蛋白主要以可溶性方式存在，纯化蛋白经Western—blot鉴定有特异性反应条带。成功构建结核分枝杆菌Rv2031c原核表达载体pPro—EXHTb-2031c，并获得纯化的目的蛋白，为研究新型结核疫苗的靶抗原奠定了基础。
结核分枝杆菌 Rv2031c基因 原核表达 蛋白纯化
张薇 王丽梅 柏银兰 康健 何俊杰 徐志凯
第四军医大学微生物学教研室,西安,710032
国内会议
景德镇
中文
256-260
2009-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）