重组人凝血因子Ⅶ在BHK细胞中的表达与鉴定
目的：表达具有促凝活性的重组人凝血因子Ⅶ。 方法：用PCR的方法从质粒pUC-FⅦ中扩增人凝血因子ⅦcDNA，并将其定向克隆入真核表达载体pIRESneo中，构建重组表达载体pIRES-FⅦ，转化感受态大肠杆菌细胞后，筛选阳性重组菌落，提取重组质粒DNA，测序正确后用脂质体介导的方法转染BHK-21细胞，经G418加压筛选、细胞有限稀释等方法获得克隆细胞株，收集浓缩无血清培养上清，进行SDs-PAGE、Western blot和活性鉴定。 结果：成功构建了重组表达载体pIRES-FⅦ，实现了其在BHK-21细胞中的表达。SDS-PAGE和westem blot鉴定结果表明，表达产物中有凝血因子Ⅶ的存在，且表达产物具有促凝活性。 结论：在哺乳动物细胞中成功表达了重组人凝血因子Ⅶ，为整体止血剂的研究奠定了基础。
重组凝血因子Ⅶ BHK-21细胞 重组表达 分离鉴定 止血剂 促凝活性
吕茂民 王卓 冯晶晶 章金刚
军事医学科学院野战输血研究所，北京 100850
国内会议
成都
中文
72-74
2009-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）