人内皮抑素和人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达

摘要：

目的：为了构建编码人内皮抑素/人血清白蛋白的重组表达质粒，并在毕赤酵母(Pichia pastoris)中获得高效表达。 方法：通过重叠延伸PCR的方法，将ES和HSA两片断连接，并将其克隆入pGEM-T载体中，测序正确后，将其克隆至酵母表达载体pPIC9中，然后将鉴定正确的重组表达载体pPIC9-ES/HSA线性化后转化入GS115宿主菌。采用原位双膜法筛选表达株，并将其进行PCR鉴定后扩大培养，获得的含融合蛋白的培养液盐析后经阳离子交换层析、阴离子交换层析和亲和层析纯化，采用MTT法测定融合蛋白中内皮抑素的活性。 结果：成功构建了人内皮抑素/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIC9-ES/HSA，并筛选到表达较为理想的重组菌株pPIC9-ES/HSA-GS115，经甲醇诱导表达后纯化，融合蛋白的纯度达到92％以上，并具有抑制人血管内皮细胞系ECV-304细胞的增殖活性。 结论：成功获得了具有人内皮抑素生物活性的重组人内皮抑素/人血清白蛋白融合蛋白，该研究结果未见文献报道。

关键词： 人内皮抑素 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母 重组表达质粒 增殖活性

作者: 赵媛媛 吕茂民 杨梅 玛晶晶 章金刚

作者单位: 军事医学科学院野战输血研究所，北京 100850 解放军后勤指挥学院 军事医学科学院野战输血研究所，北京 100850

会议类型: 国内会议

会议名称: 全国血液制品学术交流会

会议地点: 成都

会议语种:中文

页码: 93-97

在线出版日期: 2009-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）