RANK与RANKL结合的亲和力测定
目的：RANKL、RANK蛋白是破骨细胞信号系统中最重要的一对配体和受体。它们在骨重建、免疫、血管病、腺体发生过程中起至关重要的作用。本研究的目的是观察RANKL、RANK蛋白的互相作用方式，测定RANK与RANK配体结合的亲和力。 方法：我们将小鼠RANK、RANKL基因用基因工程技术克隆到原核表达载体中，将之转化到大肠杆菌(E.coli)中，诱导使之表达目的蛋白，运用蛋白纯化亲和层析、凝胶过滤层析、蛋白复性等方法表达纯化制备有生物学活性的RANKL、RANK蛋白，用凝胶过滤层析及蛋白交联方法观察RANKL、RANK蛋白在溶液中的多聚状态，用GST-pulldown试验和BIAcore仪观察RANKL、RANK蛋白的相互结合并测定RANKL、RANK蛋白的平衡解离常数。 结果：从E.coli表达系统中获得了可溶性的RANKL、RANK蛋白，RANKL在溶液中呈三聚体，而RANK在溶液中呈单体，RANKL、RANK蛋白的亲和解离常数为1.09×10-10M。 结论：我们纯化制备了可溶的的RANKL、RANK蛋白，观测了RANKL、RANK蛋白的亲和力。
RANKL蛋白 RANK蛋白 破骨细胞 蛋白质亲和力 动物实验 多聚状态
张世谦 毕郑刚
哈尔滨医科大学附属第一医院骨科
国内会议
青岛
中文
667-674
2009-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）