复合探针实时荧光RT-PCR法检测甲型H1N1流感病毒核酸研究
目的：建立一种快速、准确、特异的甲型H1N1流感病毒核酸检测方法。 方法：根据复合探针荧光定量分析原理，对甲型H1N1流感病毒核酸进行实时荧光RT-PCR检测。借助计算机辅助，对甲型H1N1流感病毒基因靶序列以及检测引物和探针进行了优化筛选；利用体外转录甲型H1N1流感病毒RNA靶序列，对影响RT-PCR反应的关键因素如镁离子浓度、退火温度等参数进行了优化；通过对构建的体外转录靶序列模型的检测，对本方法的灵敏度、特异性、精确度等进行了检测和评价，并通过对288例临床标本(112例阳性标本，176例阴性标本)的检测对检测效果进行了临床考评。 结果：通过克隆甲型H1N1流感病毒靶序列并进行体外转录，获得了长度约520bp的体外转录RNA靶序列；经优化，荧光RT-PCR反应液中的镁离子浓度以4.0mmol/L为最好，退火温度以55℃为最好；本方法检测灵敏度最低可达10个拷贝的体外转录RNA分子；特异性为100％；Ct值的CV值小于5％。对288例临床标本的检测结果表明，本方法与参比试剂盒的阳总符合率为98.3％。 结论：本方法建立的荧光RT-PCR技术能够快速准确、特异、敏感地对甲型H1N1流感病毒核酸进行分析，为临床甲型H1N流感病毒RNA的快速检测提供了新的，更为简便的检测方法。
流行性感冒 流感病毒 免疫学检验 荧光RT-PCR法检测
陈苏红 刘志红 赵怡 刘琪琦 黄坚 张敏丽 徐嘉良 颜浩 王升启
军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850
国内会议
贵阳
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461-464
2009-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）