抗人红细胞单链抗体融合HIV-1 gp120抗原肽的表达与鉴定
目的：构建并表达抗人红细胞单链抗体融合HIU-1 gp120抗原肽融合蛋白(2E8ScFv-gp120)，并检测其生物学功能。 方法：利用重叠引物延伸PCR连接鼠抗人红细胞单链抗体2E8ScFv基因与HIV-1 gP120的C末端基因，2E8ScFv-gp120融合基因插入原核表达载体pET-his，转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导表达和镍亲和层析柱纯化得到2E8ScFv-gP120融合蛋白，用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的表达产物，ELISA和红细胞凝集试验检测2E8ScFv-gp120融合蛋白活性。 结果：酶切及测序结果表明表达载体pET-his-2E8ScFv-gp120构建成功，SDS-PAGE和Western blot分析表明表达产物以包含体形式在BL21菌中获得高效表达，重组蛋白的相对分子质量(Mr)为31KDa，与预期的相符。融合蛋白经镍亲和层析纯化后纯度可达85％，具有结合红细胞和抗HIV抗体双重功能。 结论：融合蛋白2E8ScFv-gp120构建成功，具有结合人红细胞和HIV-1抗体的双功能活性。
抗人红细胞 单链抗体 融合蛋白 免疫生物学 抗原肽
杨怡 刘明 王蕊 章金刚
军事医学科学院野战输血研究所,北京,100850 北京大学第三医院检验科,北京,100191 军事医学科学院野战输血研究所,北京,100850
国内会议
贵阳
中文
517-520
2009-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）