百日咳杆菌腺苷酸环化酶毒素基因的克隆及原核表达
目的：克隆百日咳腺苷酸环化酶毒素(ACT，cyaA)基因，并进行表达和纯化，为进一步开展其应用研究奠定基础。 方法：从百日咳杆菌CS株的基因组DNA中PCR扩增目的片段，克隆人质粒pET30a，构建表达载体pET30a-ACT，转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)。挑选阳性转化子，IPTG诱导表达，得到以包涵体为主的重组蛋白。目的蛋白用8M尿素变性，透析复性，再通过DEAE阴离子交换柱纯化。最后用WesternBlot法，分别检测其与全细胞百日咳疫苗免疫、无细胞百日咳疫苗免疫和未经免疫的小鼠血清的反应性。 结果：PCR扩增得到5kb左右的DNA片段。经一步过柱纯化可得到纯度达90％以上的重组蛋白，WesternBlot显示在预期位置可见蛋白显色条带。 结论：成功在大肠杆菌中表达了重组ACT，为下一步ACT的应用研究奠定了基础。
百日咳杆菌 腺苷酸环化酶毒素 原核表达 免疫印迹 基因克隆
石碧珠 张华捷 孟民杰 张庶民
中国药品生物制品检定所血清室,北京,100050 广东药学院生命科学与生物制药学院,广州,510006 中国药品生物制品检定所血清室,北京,100050 广东药学院生命科学与生物制药学院,广州,510006
国内会议
贵阳
中文
621-624
2009-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）