鸭白细胞介素2基因在毕赤酵母中的表达
根据Genbank发表的鸭IL-2基因序列设计并合成了特异性引物，以经ConA诱导的广州鸭外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板，用RT-PCR方法扩增出长度为360bp的目的基因片段。将该基因克隆到pMD18-T simple vector上，经酶切、PCR鉴定及序列测定结果表明获得了鸭IL-2成熟蛋白基因的完整克隆。测序结果表明，该成熟蛋白基因由360个核苷酸组成，共编码119个氨基酸。在核苷酸水平上，与GenBank上序列号为AY173028及AF294322的同源性高达99.4％，氨基酸的同源性达99.2％。将目的基因克隆至真核表达载体pPICZαC载体，构建重组质粒pPICZαC-DuIL-2。酵母转化子经甲醇诱导发酵分泌表达了rDuIL-2，SDS-PAGE测定，证实DuIL-2基因在Pichia pastoris中表达成功，表达的rDuIL-2分子量约为14.3kDa。白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)是T细胞和自然杀伤细胞产生的糖蛋白，能诱导T淋巴细胞增殖，增强CTL细胞毒活性，刺激细胞分泌IFN-γ等细胞因子，促进机体的细胞免疫反应；同时也能激活B淋巴细胞，参与机体的体液免疫应答。1983年Taniguchi等首次将人的IL-2克隆成功。但禽类的研究仍处在初级阶段，1997年Sundick等”4”首次从ConA活化的T细胞中获得了鸡IL-2cDNA，近年来，已在原核和真核表达系统中成功表达，而对水禽的IL-2研究起步较晚，Zhou等在国内首次克隆了鸭IL-2的基因，并在E.coli体系中得到表达，而相关酵母表达鸭IL-2，国内外至今未见报道。为了研究和开发重组鸭IL-2（DuIL-2)作为新型免疫调节和生物治疗的制剂,我们在克隆分析广州鸭IL-2基因的基础上,构建了Pichia pastoris酵母表达DuIL-2系统,并且对表达产物进行了SDS-PAGE分析。
鸭 白细胞介素2基因 毕赤酵母 序列设计 特异性引物
张欣 崔敏 罗满林 贺东生 黄毓茂 房红莹 陈矩豪 马魁
华南农业大学兽医学院,广东 广州 510642 福建农林大学动物科学学院,福建 福州 350002
国内会议
中国畜牧兽医学会动物传染病学分会教学专业委员会第六届第12次学术研讨会
新疆石河子
中文
383-386
2008-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）