猪传染性胃肠炎病毒M蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
本研究根据GenBank发表的TGEV TS株全基因核苷酸序列，设计了1对用以扩增TGEV主要结构蛋白M基因的特异性引物。利用RT-PCR方法扩增TGEV HB06株M基因，并将其克隆到pMD18-T载体中，进行EcoRI和XhoI双酶切鉴定，将获得的M基因片段定向亚克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中，构建了重组原核表达质粒pGEX-6P-M，转化Rossetta(DE3)感受态细胞，用IPTG诱导重组菌株表达了融合蛋白。结果表明，从TGEV HB06株扩增得到了M基因片段，该基因全长789bp，编码262个氨基酸，与TS株、Purdue-115株、TFI株和H16株的M基因同源性分别为97％、99％，96％和97％。SDS-PAGE电泳结果显示，重组表达质粒获得了约56Kda的目的带，其中M蛋白的分子质量约为30kDa，与预期的结果一致，并且表达产物主要以包涵体的形式存在;Sestern-blot分析表明，表达的M重组蛋白可以被免源抗TGEV阳性血清识别;试验结果证明，TGEV的M基因高度保守，在大肠杆菌表达系统内成功表达了TGEVM蛋白。
猪传染性胃肠炎 TGEV病毒 M蛋白 基因克隆 原核表达
张小波 左玉柱 刘媛 范京惠 李潭清 李建辉 孙彦新
河北农业大学动物科技学院 河北 保定 071001
国内会议
南宁
中文
775-781
2009-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）