乙型脑炎病毒E蛋白在大肠杆菌中的高效表达
目的：将乙型脑炎病毒E蛋白基因克隆至pET-28a(+)表达载体，构建原核表达质粒pET-28a(+)/E，并使该基因在E.coli中高效表达，为进一步研制乙脑早期诊断试剂奠定基础。 方法：以乙型脑炎病毒疫苗株全基因序列为模板设计引物，通过RT-PCR 方法扩增目的片段，将其克隆到pMD18-T载体中，得到克隆质粒pMD18-T/E。pMD18-T/E经Xho I和EcoR I酶切，测序后连接pET-28a(+)载体，构建了重组原核表达质粒pET-28a(+)/E。转化至大肠杆菌BL21(DE3)后，利用IPTG诱导获得高效表达。 结果：扩增出了1500bp的基因片段，与预期大小一致，测序后经Blast验证与已发表乙型脑炎病毒SAl4-14-2株E蛋白基因序列同源性为98％，成功克隆至表达载体pET-28a(+)并获得高效表达，表达产物分子量约为53kDa。 结论：该表达产物的稳定高效表达为乙脑的诊断试剂开发提供了依据。
猪乙型脑炎 JEV病毒 E蛋白 大肠杆菌 高效表达 基因克隆
张丹 刘昊 鲁会军 金扩世 于长勇 胡博 颜雯 金宁一
军事医学科学院军事兽医研究所,吉林 长春 130062 吉林大学畜牧兽医学院,吉林 长春 130062 云南农业大学动物科技学院,云南 昆明 650201 军事医学科学院军事兽医研究所,吉林 长春 130062
国内会议
南宁
中文
801-803
2009-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）