猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析
猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行,对其发生及调控机制尚不清楚。本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序列(CS-B)及其介导的Leader-body结合位置,结果发现PRRSV mRNA分子的转录可使用经典(canonical)及非经典(noncanonical)TRS-B进行。通过对PRRSV感染性克隆pAPRRS进行定点基因突变及其所致拯救病毒的鉴定,以此确定TRS-L和TRS-B突变对亚基因组转录及病毒感染性的影响。结果表明： (1)同时突变TRS-L最后两个CC的全长突变体pLeaderD对MARC-145细胞无感染性,且未产生sgmRNA7转录本;而只突变最后一个C的pLcaderR能拯救出突变病毒,但突变位点在突变病毒系列传代中发生回复突变,由此证明TRS-L 3的一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有一定修复功能。 (2)突变TRS123 3”最后两个碱基的pM7Da或突变TRS9 3”最后两个碱基的pM7Db均能拯救出病毒,而共同含有TRS9和TRS123 3”最后两个碱基突变的pM7DabR不能拯救出病毒,对拯救的突变病毒进行鉴定发现,TRS123突变的拯救病毒在一系列传代中突变碱基回复,而TRS9突变的拯救病毒传代过程中稳定遗传;突变体pM7S3(含有TRS123的三个碱基突变)和pM7Db虽能拯救出活病毒,但突变都使相应的sgmRNA7转录量至零,且vM7S3滴度偏低。由此证明了TRS9和TRS123都可单独承担PRRSV sgmRNA7的转录调控及其3”一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有修复功能;PRRSV的N蛋白主要来源于sgmRNA7.1的翻译。 (3)所有突变病毒的亚基因组中leader-body结合位点碱基均来TRS-B,为负链RNA不连续转录模型理论提供直接证据。
猪繁殖与呼吸障碍综合征 RT-PCR技术 转录调控因子 序列分析 病毒鉴定
郑海红 孙志 朱兴全 袁世山
中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室 上海200232 华南农业大学兽医学院广东广州 510642 中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室 上海200232 华南农业大学兽医学院 广东 广州 510642
国内会议
南宁
中文
372-380
2009-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）