E.coli LTb与PRRSV gp5融合基因原核表达及小鼠免疫效果研究
采用PCR重叠延伸技术将LTb和PRRSV ORF5基因通过柔性连接进行融合后,克隆入原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,经鉴定后得到重组质粒pET-LTb-gp5,将重组质粒转化到受体菌BL21(DE3)中,并用诱导剂IPTG进行诱导表达,经15％SDS-PAGE电泳检测,表达得到的蛋白大小为26KD。经WesternBlotting分析,表达蛋白均能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应。为了比较猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的原核表达蛋白gp5蛋白及融合表达的LTb-gp5蛋白的免疫效果。将表达产物gp5蛋白及融合表达的LTb-gp5蛋白免疫6-8周龄ICR小鼠,并设对照组,用间接ELISA法和MTT法检测小鼠血清中特异性抗体水平以及脾脏中T,B淋巴细胞增殖功能。结果gp5蛋白以肌肉注射途径免疫效果较好;三免后抗体达到较高水平,其中LTb-gp5 IM与gp5乳化组之间差异不显著,而这两组与gp5 IM差异显著;LTb-gp5IM、gp5乳化组和gp5IM均能够诱导脾脏T,B淋巴细胞增殖。
猪繁殖与呼吸综合征病毒 gp5融合基因 原核表达 免疫效果 PCR重叠延伸技术
袁秀芳 刘焕 王一成 徐丽华 张存
浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州 310021
国内会议
南宁
中文
406-412
2009-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）