猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用
用纯化的重组杆状病毒表达的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立了一种间接ELISA用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf9)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化。制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7％左右;Ni2+亲和层析柱纯化获得重组蛋白回收率为1.7-1.9μg/108细胞,纯度为90.1％;重组蛋白可被特异性抗体识别,具有良好的免疫活性。建立的ELISA法对30份已知阴性血清样本检测临界OD值为0.343;ELISA与IPMA对150份血清进行平行检测符合率为95.3％(143/150),特异性为91.2％(31/34),敏感性为96.5％(112/116);其他几种常见猪病毒参考血清无交叉。组装的试剂盒批内和批间变异系数分别为4.0％-4.8％和8.9％-9.9％;置-20℃保存12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果,接种后第5w抗体阳转,第8w-9w抗体水平达到高;对来自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场1085份血清抗体检测,阳性率为73.6％,研制的ELISA试剂盒为临床PCV2血清抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。
猪圆环病毒2型 重组蛋白 间接ELISA 抗体检测试剂盒 纯化工艺
张朝霞 刘长明 危艳武 袁婧 黄立平
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨 150001
国内会议
南宁
中文
501-505
2009-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）