猪圆环病毒2型Cap蛋白间接ELISA诊断方法的建立和应用
以纯化的原核表达的猪圆环病毒2型(PCV2)重组结构蛋白(rCap蛋白)为包被抗原,建立PCV2间接ELISA诊断方法;对最适包被抗原浓度、待检血清稀释浓度、重组抗原包被条件、封闭液的筛选、阴阳性临界值等条件进行了优化;对优化后的ELISA检测方法进行特异性试验、临床应用实验;组装试剂盒并进行试剂盒保存期试验。结果：优化反应条件后确定的抗原最适包被浓度为2.815μg/mL,抗原最佳包被时间为37℃ 2h：血清最适稀释度1:40,酶标抗体最适稀释度为1:500,最佳封闭液为1％的BSA;阴阳性临界值判定标准OD450≥0.33,判为阳性,OD450<0.33,则判为阴性。特异性试验结果表明只有PCV2阳性血清反应后的OD450>0.33,包括抗PCV1阳性血清在内的其他5种抗血清反应后的OD450<0.33,说明所建立的ELISA方法具有良好的特异性。经对临床疑似PCV2感染的100份血清样品进行检测,阳性检出率为69％。组装试剂盒在4℃至少可保存12个月以上,说明所建立的诊断方法可以在生产中大量推广应用。本研究成功建立了能特异性检测抗PCV2血清抗体的ELISA检测方法。
猪圆环病毒2型 Cap蛋白 间接ELISA法 抗体检测 组装试剂盒
张志凌 闫若潜 吴志明 谢彩华 王东方 王英华 贾松涛
河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州 450008
国内会议
南宁
中文
508-512
2009-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）