猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立
采用PCR方法从猪瘟病毒兔化弱毒(Hog Cholera Lapinized Virus HCLV)疫苗株cDNA中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,将其克隆进原核表达载体pET32a(+),构建重组原核表达载体pET-NS3。将pET-NS3转化进大肠杆菌Rosetta(DE3)进行优化表达,采用SDS-PAGE分析NS3融合蛋白主要以包含体形式表达,分子大小约95 kD.Western Blotting分析表明NS3融合蛋白具有免疫原性。采用Ni+亲和层析方法纯化得到NS3融合蛋白(90％)。以纯化的NS3融合蛋白为抗原初步建立了检测CSFV NS3抗体的间接ELISA方法,对221份不同猪群和年龄的猪血清样品进行检测。将检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果进行对比,结果阳性符合率为83.33％,阴性符合率为89.38％,总符合率为86.43％。实验结果表明：重组原核表达载体pET-NS3构建成功,NS3融合蛋白在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功地表达,建立的间接ELISA检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果有较高一致性。
猪瘟病毒兔化弱毒 NS3基因 基因克隆 原核表达 融合蛋白 蛋白纯化 免疫印迹 间接ELISA 病毒检测
蒋大良 余兴龙 李润成 葛猛 颜爱 李杰 刘春红 刘俊琦
湖南农业大学动物医学院,湖南长沙 410128
国内会议
南宁
中文
655-660
2009-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）