抗人红细胞单链抗体与猪瘟E2蛋白双功能融合 蛋白的构建及生物学活性检测
为构建既具有凝集性又具有抗原性的双功能融合蛋白,本研究以重组质粒PMD-2E8ScFv和PETmE2为模板,应用PCR方法分别扩增出目的基因2E8ScFv(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和mE2(猪瘟E2蛋白主要抗原编码区基因)。采用重叠延伸(SOE)PCR的方法将2E8ScFv和mE2拼接成融合基因2E8mE2,经测序正确后,将2E8mE2亚克隆入PET-DsbA原核表达载体,经PCR和酶切鉴定,表明重组表达质粒PET-DsbA-2E8mE2构建成功。将该重组表达质粒转化入宿主菌BL21(DE3)Plyss中,用IPTG进行诱导表达,表达的融合蛋白经SDS-PAGE电泳、免疫印迹和BandScan软件分析。结果表明：2E8mE2融合基因在大肠杆菌中获得了高效表达,表达产物大部分以不溶的包涵体形式存在,分子量约为65KDa,与预期的大小一致;融合蛋白的表达量约占菌体总量的30％左右。Western blotting与红细胞凝集试验证实：2E8mE2融合蛋白既能够与人红细胞结合,又能够与CSFV抗体反应,具有双功能特性。
猪瘟 单链抗体 双功能蛋白 原核表达 红细胞凝集试验 2E8mE2融合蛋白
覃绍敏 白安斌 吴健敏 廖文军 袁书智 华俊 关忠谊
广西兽医研究所,广西南宁,530001 惠朋动物药业有限责任公司,广西南宁,530001
国内会议
南宁
中文
664-668
2009-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）