pEgr-p16辐射诱导表达特性及抗肿瘤作用的实验研究
目的：本研究根据电离辐射可诱导早期生长反应-1(Early growthresponse-1，Egr-1)基因启动子激活启动下游外源目的基因表达增强的分子机制，以及直接作用于细胞周期，抑制细胞分裂的抑癌基因p16的抗肿瘤作用，构建了含有放射敏感性启动子Egr-1和人源性的p16基因的重组表达质粒pEgr-p16，探讨不同剂量γ射线照射后诱导脂质体介导的p16基因在HeLa细胞和SMMC-7721细胞中的表达及抗癌作用。方法：将p16的全长cDNA插入质粒pcDNA3.1的多克隆位点，构建成pcDNA3.1-p16重组质粒；再以可被辐射激活的Egr-1启动子替换pcDNA3.1的CMV启动子，构建成pEgr-p16重组表达质粒。用脂质体介导转染入人肝癌细胞SMMC-7721和人的宫颈癌细胞HeLa转染后经48～72h，待细胞生长接近融合时按1:4的密度传代，继续培养至细胞密度达50％～70％融合，更换含有一定浓度的G418的培养液进行筛选，约10～20d后，可见有抗性克隆形成，经G418筛选扩大培养得到稳定表达p16的细胞株，细胞计数记录了照射转染pEgr-p16重组表达质粒的癌细胞的增殖效应，用RT-PCR的方法研究了经60Coγ射线照射后p16的转录水平，用流式细胞术对细胞周期和p16的蛋白表达水平的剂量效应和时程变化作了充分的研究，最后用流式细胞术对周期蛋白D和周期蛋白激酶4的表达也作了一些初步的研究。
抑癌基因p16 Egr-1启动子 pEgr-p16重组质粒 电离辐射 抗肿瘤作用
刘建香 苏旭
中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所 北京，100088
国内会议
中国毒理学会放射毒理专委会联合免疫毒理专委会、中国环境诱变剂学会致突、致畸、致癌专委会2008年全国学术会议
兰州
中文
55-56
2008-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）