分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及在HepG2细胞中的表达
目的：构建分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体,并在肝癌细胞HepG2中表达,为研究核心蛋白聚糖的抗肿瘤作用奠定基础。 方法：利用特异性引物,应用PCR技术扩增核心蛋白聚糖全长基因cDNA片段,与pcDNA3.1载体进行连接,并转化到大肠杆菌JM109中扩增以获得重组载体,应用双酶切、PCR以及测序鉴定此重组载体;脂质体Lipo-fectamine 2000介导重组载体转染HepG2,经G418(800 ug/ml)筛选建立稳定转染细胞株,分别采用RT-PCR、免疫组化法和westernblot检测其表达。 结果：获得了约1080 bp大小的特异性DNA片段;PCR产物与真核表达载体进行连接,经过双酶切、PCR以及测序鉴定证实分泌型核心蛋白聚糖cD-NA片段正确插入真核表达载体pcDNA3.1中。RT-PCR方法可见转染组mRNA表达明显增多,免疫组化和westernblot方法可见转染组细胞DCN蛋白表达明显增高。 结论：成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-DCN,建立了稳定转染DCN的HepG2细胞株。
核心蛋白聚糖 真核表达载体 聚合酶链反应 肝癌细胞 HepG2细胞 抗肿瘤作用
张玉成 杜珍武 王雅丽 张桂珍
吉林大学 中日联谊医院中心实验室,长春 130033
国内会议
佳木斯
中文
100-104
2008-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）