通过嵌合体途径提高体细胞再克隆牛效率的研究
尽管许多哺乳动物都已被成功克隆，但克隆效率非常低，仅有低于5％的重组胚胎可以发育成个体，再克隆的效率则更低。体细胞克隆效率低主要体现在克隆胚胎质量差(与正常胚胎相比细胞数少、凋亡细胞数多)，克隆胎儿妊娠率低，流产率高、出生后健康状况不艮。据统计，80％以上的克隆胎儿面临流产，出生的50％以上的克隆动物因器官发育不全出现早期夭折，存活的克隆后代往往存在各种生理异常，因而提高大型家畜动物的克隆效率成为克隆技术应用于生产的瓶颈问题。通过嵌合体途径，利用IVF来源胚胎的卵裂球改善体细胞重编程状况、补偿克隆胚胎发育过程中的缺陷(如滋养层细胞数少导致的胎盘异常，器官异常发育等)，将有助于提高再克隆胚胎的体内、外发育能力，不仅可以提高再克隆的效率，加快克隆技术应用到生产的进程，而且如果乳腺中含有大部分转基因目的成分，将提高转基因大家畜n乳腺生物反应器”的制作效率，必将加快转基因牛核心群扩繁的进程，并可推广到转基因山羊、绵羊、猪和兔的基础群的生产和扩繁。此外，如果得到的后代为生殖嵌合，可以将其遗传物质遗传给后代，将为良种家畜品质资源的保护提供一条新途径。本研究以本实验室已经建立的转hLF基因克隆牛的耳成纤维细胞系为核供体细胞，得到再克隆胚胎，然后通过显微注射将一个8-细胞期IVF胚胎的卵裂球注射到同一发育时期的8-细胞再克隆胚胎中，制作嵌合体胚胎。从亚细胞水平比较再克隆胚胎和嵌合体胚胎两者的体外发育能力，主要包括囊胚发育率，ICM、TE细胞数、总细胞数、ICM：CM比值。并通过胚胎移植比较两者体内发育能力，主要包括受体牛妊娠率、妊娠35天的胎牛数、出生牛教以及断奶数，以期通过此方法提高转基因克隆牛的再克隆胚胎的体内外发育能力。结果显示：(1)两者囊胚发育率相当，但嵌合体胚胎组的ICM、TE细胞数、总细胞数.ICM：CM比值均高于再克隆组;(2)嵌合体胚胎组的受体牛妊娠率、分娩率、犊牛出生率和存活率均高于对照组;(3)嵌合体组流产牛的各组织器官经PCR鉴定，均含GFP和hLF转基因;(4)经检测存活的4头再克隆嵌合体牛的血液，耳朵和尾巴样本中有2头为转基因阳性。
牛 繁殖技术 体细胞核 克隆胚胎 胚胎发育 嵌合体
陈秀萍 李荣 丁方荣 李松 戴蕴平 李宁
中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,北京,100193
国内会议
青岛
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2008-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）