昆白系小鼠胚胎干细胞饲养层培 养体系的优化筛选
目的：建立稳定高效的昆白系小鼠胎儿戍纤维细胞(mouseembryonic fibroblast，MEF)饲养层培养体系，用于分离、培养胚胎千细胞(embryonic stem cell，ES细胞). 方法：1.分别选取妊娠11 d，14.5 d和16 d的孕鼠胎儿分离成纤维细胞，比较分离不同胚龄胎儿的成纤维细胞增殖及纯化情况，选择成纤维细胞分离培养的最适胚龄和最佳培养条件，观察成纤维细胞在增殖、传代、冻存及复苏方面的条件。2.选取生长旺盛并已纯化的第3代成纤维细胞，经丝裂霉素-C处理后，用细胞计数板计算细胞数，分别按密度为1×104个/mL，1×106个/mL和1×1 08个/mL接种，制备饲养层，观察不同密度饲养层的生长状况。3.取妊娠4 d的昆白系小鼠囊胚，接种在不同密度饲养层上，观察不同密度饲养层上囊胚、ICM及ES细胞的克隆生长情况。 结果：1.14.5 d的孕鼠胎儿可分离到大量的成纤雏细胞，杂细胞少，并且细胞增殖快。生长旺盛、已纯化的第三代成纤维细胞最适宜做ES细胞的饲养层。2.囊胚在密度为1×106个/mL的饲养层上，贴壁率和ICM孵出率显著高于其他两组;密度为1×106个/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率高于密度为1 x 104个/mL(差异极显著，P＜0.01)和1 x 108个/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率(差异显著，P＜0.05);而1×104个/mL饲养层和1×108个/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率差异不显著(P＞0.05)。 结论：14.5 d的孕鼠胎儿分离培养戍纤维细胞效果最好;以1 × 106个/mL密度接种的MEF作为饲养层，最适合用于分离培养昆白系小鼠ES细胞，有利于囊胚的发育，ICM的增殖，促进ES细胞的增殖，并起到抑制其分化的作用。
胚胎干细胞 成纤维细胞 分离培养 动物繁殖
赵晶 柏学进 封纪武 董雅娟
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2008-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）