猪卵丘细胞凋亡与孤雌激活胚胎发育关系的研究
在卵泡发育过程中，卵母细胞发育成熟与其周围的卵丘细胞的作用是分不开的。卵丘细胞不仅参与维持卵母细胞减数分裂阻滞，还能诱导卵母细胞减数分裂恢复和支持卵母细胞细胞质的成熟。本研究检测了在猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)体外培养过程中卵丘细胞凋亡的生物学特征，检测到了猪COCs在体外培养过程中卵丘细胞凋亡的典型特征;对卵泡大小、卵丘细胞扩展、培养时间、生长激素(STH)和胰岛素(Insulin)时卵丘细胞凋亡的影响进行了研究;研究了卵丘细胞凋亡与细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2在卵丘细胞上的定位和表达规律，测定了细胞周期蛋白Cyclin-B1、CDK1表达与卵丘细胞凋亡的关系;对3种卵母细胞孤雌激活的方法进行了对比，筛选出了猪卵母细胞孤雌激活的最佳方法和激活参数;对猪孤雌激活胚胎的发育能力(成熟率、卵裂率)和与之相对应的卵丘细胞凋亡率的关系进行了研究。卵丘细胞凋亡检测图像用形态分析软件进行分析，所得资料采用dps统计软件进行显著性检验。试验结果得出：1.采用电子显微技术(EM)、苏木素-伊红(HE)染色、Hoechst33342-PI荧光染色法，原位末端标记技术(TUNEL法)检测猪卵丘细胞凋亡，检测到了卵丘细胞凋亡的典型的特征，证明了猪COCs在体外培养过程中卵丘细胞确实存在着凋亡现象。 2.用Hoechst 33342-PI荧光染色法检测卵丘细胞凋亡率与坏死率。试验结果表明大卵泡(直径≥6mm)获得的COSs卵丘细胞凋亡率最高(21.97±4.39)，与其它实验组相比差异显著(P＜0.05);卵丘扩展程度良好的COCs卵丘细胞凋亡率比卵丘扩展程度差的高，但差异不显著(P＜0.05);培养时间与卵丘细胞凋亡率正相关;卵母细胞体外成熟培养液中添加STH、Insulin可以抑制卵丘细胞凋亡。 3.采用链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组织化学方法研究了卵丘细胞凋亡与凋亡相关基因Bax、Bcl-2和细胞周期蛋白Cyclin-B1、CDK1表达的关系。结果表明，Bcl-卜2及Bax均表达在细胞浆上，Bax的表达与卵丘细胞凋亡正相关，Bcl-2在正常的卵丘细胞上有较高水平的表达;cycl in-B1、CDK1的表达与卵丘细胞凋亡程度相关，凋亡程度高的卵丘细胞上Cyclin-B1和CDK1有较高表达. 4.猪成熟卵母细胞用电激活、乙醇激活、钙离子载体A23187三种方法激活，试验结果表明，电激活处理比乙醇激活，钙离子载体A23187有更高的卵裂率(67.75±1.03)桑椹胚率(13.52±2.05)，差异显著(P＜0.05)，最佳激活参数为130V/mm，80μs、-次脉冲激活。 5.猪卵母细胞的发育能力(成熟率、卵裂率、桑椹胚率)与其卵丘细胞凋亡相关。卵丘细胞凋亡率高，卵母细胞的发育能力差，统计分析其结果差异显著(P＜0.05)，退化或死亡的卵母细胞的卵丘细胞凋亡率(19.23±1.21)、坏死率(5.86±0.59)最高，差异显著(P＜0.05)。
细胞凋亡 体外成熟 孤雌激活 胚胎发育 卵丘细胞 猪卵母细胞
王星 姜午旗 罗光彬
沈阳农业大学动物胚胎工程实验室 辽宁 沈阳 110161
国内会议
青岛
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2008-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）