Smac／DIABLO和Survivin shRNA联合转染对大肠癌Lovo细胞凋亡的影响
背景和目的:Smac/DIABLO是一种新发现的促凋亡蛋白，通过阻滞凋亡抑制蛋白(包括Survivn)，激活caspase-9和caspase-3而发挥作用。本实验研究线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO和沉默凋亡抑制基因Survivin联合应用对大肠癌细胞凋亡的影响及其促凋亡机制。 方法:构建Survivin的shRNA-EGFP质粒和Smac-pcDNA3.1质粒，将其用脂质体单、共转染至大肠癌Lovo细胞； Western blot检测Survivin基因和Smac基因的蛋白表达；Hochest 33258染色观察凋亡核形态学变化，并粗略计数凋亡率；流式细胞仪PI单染测凋亡周期:Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性。 结果:转染48h后单、共转染组的Smac蛋白水平增加而Survivin蛋白水平下降；单、共转染组Hochest 33258染色可见明显的凋亡核形态学变化，凋亡率高于各对照组，且共转染组凋亡率18.54±1.70％高于单转染组9.65±1.76％、15.03±0.32％；Smac组G0/G1期增多为51.01±6.25％，而Survivin shRNA组S期细胞增多为53.29±1.27％(P<0.05):Caspase-3活性比Smac和Survivin shRNA共转组为169.4±3.2％，高于Smac组143.3±4.8％、Survivin shRNA组151.9±6.3％，且都高于各对照组(P<0.05)。 结论:Smac/DIABLO和Survivin shRNA协同作用激活caspase-3途径，抑制大肠癌Lovo细胞生长而促进细胞凋亡，Smac阻滞细胞周期于G0/G1期而RNA干扰Survivin后细胞周期阻滞于S期。
大肠癌 Smac/DIABLO蛋白 survivin shRNA Caspase-3 细胞凋亡 细胞周期
高飞 郭文 王继德 熊英
南方医科大学南方医院消化病研究所,广东广州 510515
国内会议
广州
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110-116
2008-06-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）