大鼠神经营养因子-4基因重组真核表达载体的构建及其在L929细胞中的表达
目的：构建大鼠神经营养因子-4(NT-4)基因真核表达载体并观察其稳定转染的小鼠成纤维细胞系中神经生长因子-4(NT-4)表达的情况。 方法：用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)以大鼠海马总RNA为模板，应用基因重组技术将大鼠神经营养因子-4(NT-4)的全长基因克隆到真核表达载体pcDAN3中，用限制性内切酶酶切分析和DNA测序对重组质粒载体pcDNA3-NT-4进行鉴定。采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将重组质粒载体转染L929细胞，用G418筛选出抗性阳性克隆并培养至20d。应用NT-4免疫细胞化学反应来分析该细胞表达NT-4的情况，并观察该细胞培养上清中的NT-4对PCI2细胞的促分化作用。 结果：重组真核表达载体pcDNA3-NT-4构建成功，NT-4蛋白在L929细胞中表达，并具有良好的生物学活性，为进一步开展NT-4基因治疗神经系统疾病奠定了基础。
神经生长因子 真核表达 成纤维细胞系 基因转染 脂质体 逆转录聚合酶链反应 基因重组 基因治疗
王廷华 晏燕 朱榆红
昆明医学院神经科学研究所 昆明医学院第二附属医院神经内科 昆明 6501011
国内会议
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360-365
2006-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）