hBDNF-GFP基因转染神经干细胞移植对视神经损伤大鼠视网膜BDNF表达的影响
目的：探讨hBDNF-GFP基因转染神经干细胞移植后对视神经损伤大鼠视网膜BDNF表达的影响。 方法: 1、将78只SD大鼠如下处理:6只为正常对照组,余下72只行右侧视神经夹伤,并行左侧视神经单纯暴露作为假损伤组,随机平均分为三个损伤亚组:分别于玻璃体腔内注射0.01M PBS,GFP基因转染神经干细胞(GFP-NSCs)和hBDNF-GFP基因双转染神经干细胞(hBDNF-GFP-NSCs)。各组分别于移植后3d,7d,14d和28d处死取视网膜匀浆,ELISA法检测各组上清液中BDNF含量。 2、另取6只视神经损伤大鼠移植hBDNF-GFP-NSCs,分别于2w、4w和8w各处死2只大鼠,取眼球做冰冻切片观察移植细胞存活、迁移情况。 3、取35只SD大鼠,5只作为正常对照组,其他30只制作右眼视神经损伤后随机分为3组,每组10只,分别注射普通NSCs,GFP-NSCs和hBDNF-GFP-NSCs,于术后4周和8周各组分别处死5只大鼠,Western-blot检测右眼视网膜组织中BDNF表达。 结果: 1、ELISA结果显示,正常对照组与假损伤组之间比较差异无显著性(P＞0.05),移植手术后第3天时,三个损伤亚组视网膜匀浆上清中hBDNF含量明显增加(与假损伤组比较P＜0.05),而三组间无明显差异(P＞0.05)；7天时,GFP-NSCs组与假损伤组比较差异有显著性(P＜0.05),而PBS组、hBDNF-GFP-NSCs组与假损伤组比较无显著性差异(P＞0.05),PBS组与GFP-NSCs组间及hBDNF-GFP-NSCs组与GFP-NSCs组间差异显著(P＜0.05):但在移植14天和28天时,PBS组和GFP-NSCs组中视网膜BDNF含量降低,而hBDNF-GFP-NSCs组中BDNF含量明显升高与其他三组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。 2、冰冻切片示移植后,hBDNF-GFP-NSCs可在视网膜内存活,且随时间延长能迁移到视网膜各层。 3、Western-blot检测显示,各组内第4周和第8周BDNF表达无显著差异,移植hBDNF-GFP-NSCs组视网膜组织中BDNF表达明显高于于其他3组。 结论: hBDNF-GFP基因转染神经干细胞移植后可在宿主视网膜长期存活,且可以稳定高表达BDNF。
视神经损伤 视网膜 神经干细胞移植 hBDNF-GFP基因 动物实验
冯东福 刘勇 陈二涛 潘栋超 汪洋
上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科(201900)
国内会议
杭州
中文
76-79
2008-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）