犬钩虫(Ancylostoma caninure)天冬氨酸蛋白酶基因的克隆和在大肠杆菌中的表达与鉴定
目的:对犬钩虫(Ancyiostoma caninum)天冬氨酸蛋白酶Asp基因进行了克隆,鉴定,并在原核系统中进行表达。方法: 以犬钩虫总RNA为模板,用RT-PCR法对犬钩虫天冬氨酸蛋白酶Asp基因进行扩增,获得的Asp cDNA产物克隆进行pMD-18T载体,用PCR筛选阳性克隆。碱裂解法进行质粒提取,单、双酶切进行鉴定并测序。将测序正确的阳性克隆进行双酶切,构建到表达载体pET-32a中,将此重组质粒先转化到E.coil DH5a内,提取质粒,酶切鉴定阳性,再转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)菌株内,对转化菌株用IPTG。进行诱导培养。收集培养液,破菌、离心,上清进行SDS-PAGE,通过电转移将胶中蛋白转到硝酸纤维素膜上后进行免疫印迹分析。结果: 电泳发现转化了重组质粒的菌株有表达蛋白,所表达蛋白相对分子量为40kDa,抗体检测有特异条带大小为40kDa。结论成功进行了犬钩虫天冬氨酸蛋白酶Asp基因的克隆表达。
犬钩虫 天冬氨酸蛋白酶 大肠杆菌 Asp基因
韦华 杨玉荣
厦门大学生命科学学院寄生动物研究室 厦门 361005
国内会议
武夷山
中文
214-220
2006-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）