猪肺炎支原体P97C末端基因重组腺病毒的构建与鉴定

摘要：

从猪肺炎支原体基因组中扩增其黏附因子P97C末端基因，然后通过KpnⅠ和SalⅠ酶切位点把该基因克隆入经过同样双酶切的穿梭载体pShuttle-CMV中。将鉴定正确的的重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后电转化入内含腺病毒骨架载体的BJ5183感受态细胞中，通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA。纯化后的重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切线性化后转染AD293细胞获得重组腺病毒。重组腺病毒经间接免疫荧光和WesternBlot鉴定，证明了该重组腺病毒成功的表达了P97C末端蛋白。将该重组病毒进行纯化并进行滴度测定，获得了高纯度、高滴度的表达P97C末端基因的重组腺病毒，为研制新型猪肺炎支原体疫苗奠定了基础。

关键词： 猪肺炎支原体 猪喘气病 重组腺病毒 P97C末端蛋白 黏附因子

作者: 陈超 辛九庆 李媛 王亮 郭丹 曹培丽 乔祖建

作者单位: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/ 细菌病研究室 国家牛传染性胸膜肺炎参考实验室， 黑龙江 哈尔滨 150001

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 224-226,230

在线出版日期: 2008-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）