猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因，并将其插入表达载体pET32a构成重组质粒pET32a-p27。重组子经测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导，对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析，并将纯化定量后的表达产物免疫小鼠，制备单克隆抗体。结果显示，gag基因的p27相应片段为763bp，其表达产物相对分子量为46ku。经镍柱纯化，获得目的蛋白p27纯度可达90％以上。利用淋巴细胞杂交瘤技术获得5株稳定分泌抗p27的单克隆抗体细胞株，分别命名为1A5、1C7、3C2、2D12、3D12。5株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1:12800、1:25600、1:819200、1:51200和1:409600。免疫球蛋白类型均为IgG1型，轻链均为λ链。Western blot和IFA试验结果表明所获得的单克隆抗体均对病原检测具有很高的特异性。该研究为进一步开发SIV早期诊断试剂盒奠定了基础。

关键词： 猴免疫缺陷病毒 p27蛋白 单克隆抗体 PCR技术 免疫球蛋白 病原检测

作者: 华秋东 吴志军 姜成刚 沈楠 陈维多 相文华 周建华

作者单位: 东北农业大学，黑龙江 哈尔滨 150030 哈药集团，黑龙江 哈尔滨 150018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/ 大动物传染病研究室/ 慢病毒及马病课题组，黑龙江 哈尔滨 150001

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 410-414

在线出版日期: 2008-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）