猪细小病毒LXB-PPV-20-06株NS1基因的原核表达及免疫活性的鉴定

摘要：

利用PCR技术扩增PPV LXB-PPV-20-06株NS1基因全序列，将目的基因与原核表达载体pET-32a(+)进行连接并转化，重组质粒经PCR和双酶切鉴定并测序。测序结果表明，目的基因正确地插入到重组质粒当中。通过对表达宿主菌的选择，PPV LXB-PPV-20-06株NS1基因在Rosetta(DE)plysS菌中的到良好的表达，并确定了NS1基因的最佳诱导条件：IPTG终浓度为0.6mmol/L、诱导时间为3.5h、诱导温度为37℃。表达产物经SDS-PAGE分析，得到分子量约为97ku的重组蛋白，除了包涵体形式表达外，一部分重组蛋白以可溶性形式表达。重组蛋白经Western blot检测，可与PPV阳性血清反应。这为NS1蛋白在临床诊断中的应用打下基础。

关键词： 猪细小病毒 NS1基因 原核表达 免疫活性 PCR技术 临床诊断

作者: 戚亭 崔尚金 张超范

作者单位: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/ 猪传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 210-213

在线出版日期: 2008-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）