重组质粒表达的IBDV vp2基因特异miRNA对IBDV复制的抑制作用

摘要：

用Genscript软件分析IBDV结构蛋白vp2基因序列，预测得5个潜在的miRNA，将其插入表达载体pRFPRNAiC。将重组载体与报告载体pVP2-GFP共转染DF-1细胞，经Northern dot blotting检测确认miRNA获得表达。对转染细胞进行荧光共聚焦显微镜观察和流式细胞术定量分析，结果显示融合报告基因表达抑制效率在59.7％～78.5％之间。分别将抑制效率较高的miVP2A和miVP2E克隆入含neo基因的pTarget载体，用获得的重组质粒转染DF-1细胞，经G418筛选后用IBDV Lurket株感染，用半定量RT-PCR检测vp2基因转录子，用病毒滴定法测定细胞培养上清中的病毒TCID50。结果显示，针对vp2基因的miVP2A和miVP2E均能有效抑制IBDV基因表达和病毒复制，可使IBDV感染细胞上清中的TCID50分别下降5和6lgs，为进一步用RNAi抑制IBDV复制研究奠定了基础。

关键词： RNA干扰 重组质粒表达 vp2基因 IBDV复制 IBDV结构蛋白 病毒复制 RNAi抑制 鸡法氏囊病病毒

作者: 王永娟 孙怀昌 沈鹏鹏 张鑫宇 夏晓莉 夏冰

作者单位: 扬州大学 兽医学院，江苏 扬州 ，225009

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 162-166

在线出版日期: 2008-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）