H3亚型猪流感病毒的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术

摘要：

本研究建立一种简便、灵敏而又特异的环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification Method，RT-LAMP)用于H3亚型流感病毒的检测。根据GenBank中注册的H3N2亚型猪流感病毒(SIV)HA基因保守区的序列，设计一组对应HA序列6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增，建立RT-LAMP反应体系，优化LAMP反应条件，等温扩增反应条件为65℃保温60min。扩增后产物可用核酸染色剂SYBRⅠ进行鉴定，检测结果可视(阴性为橙黄色，阳性偏绿色)；同时用特异性内切酶KpaⅠ进行酶切鉴定。用已建立的RT-LAMP技术检测临床样品，检测结果与病毒分离、RT-PCR方法符合率均达到100％。RT-LAMP技术整个检测过程只需1h～2h，不需要PCR仪和成像系统，仅需要一恒温水浴锅即可完成试验。通过特异性、敏感性试验，验证了建立RT-LAMP技术可以作为一种操作简单，灵敏性、特异性高的检测H3亚型猪流感病毒的技术。

关键词： H3亚型猪流感病毒 环介导 HA基因 特异性引物 RT-LAMP反应 等温扩增

作者: 谢青梅 冀君 曹永长 马静云 李少璃 张祥斌 陈峰 毕英佐

作者单位: 华南农业大学 动物科学学院，广东 广州 510642 中山大学 生命科学学院，广东 广州 510275

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 380-382

在线出版日期: 2008-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）