弓形虫野毒株ROP5蛋白基因的克隆、表达及反应原性研究
目的:克隆和表达弓形虫虎源野毒株ROP5蛋白基因。 方法:运用RT-PCR技术从弓形虫感染虎腹水中扩增出ROP5基因,将其克隆入T载体中进行测序和分析,并将目的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中进行诱导表达。 结果:该基因全长1650bp,编码549个氨基酸。其中前24个氨基酸构成信号肽序列。与GenBank中报道的RH株相比,有12个核苷酸有差异,导致7个氨基酸发生改变,两者核苷酸和推导氨基酸序列的同源性分别为99.2%和98.9%。转化重组质粒pETROP5的大肠杆菌BL21(DE3)在IPTG的诱导下,可表达出分子量为64.8ku的重组蛋白,并且能与弓形虫抗体发生血清学反应,表达量占菌体蛋白的15.6%。 结论:成功克隆和表达了弓形虫野毒株ROP5蛋白基因,表达的重组蛋白具有良好的反应原性。
弓形虫 野毒株 ROP5基因表达 反应原性 RT-PCR技术
乔军 夏咸柱 杨松涛 高玉伟 秦川 华育平 王立刚 刘丹 王玮 周明
军事医学科学院军事兽医研究所 ,吉林 长春 130062;中国农业科学院兰州兽医研究所 ,甘肃 兰州 730046 军事医学科学院军事兽医研究所,吉林 长春 130062 军事医学科学院军事兽医研究所 ,吉林 长春 130062 中国医学科学院实验动物研究所 ,北京 100021 东北林业大学 野生动物资源学院,黑龙江 哈尔滨 150040 黑龙江东北虎林园,黑龙江 哈尔滨 150028
国内会议
中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会
北京
中文
273-276
2008-07-01(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)