单链标记与芯片结合鉴别AIV主要亚型的研究

摘要：

结合单链标记和基因芯片两种技术，构建可同时区分AIV的H5、H7、H9血凝素亚型及N1、N2神经氨酸酶亚型的基因芯片。分别TA克隆部分禽流感病毒的M基因，H5、H7、H9亚型HA基因，N1、N2亚型NA基因，并构建重组质粒。以重组质粒为模板，用PCR方法扩增制备探针，纯化后点于氨基修饰的片子上，制备基因芯片；常规方法从待检样品中提取RNA，用Cy3标记下游引物进行RT-PCR，将荧光素引入PCR产物的反义链中；与芯片杂交，检测AIV主要亚型。结果显示检测探针可特异性的与相应的标记样品进行杂交，呈现较强的杂交信号；该方法可以准确鉴别诊断禽流感主要流行亚型，对感染样品和现地样品检测结果与RT-PCR、鸡胚接种有较高一致性，符合率为100％和96％。研究表明该方法可用于同步鉴别部分主要流行的禽流感亚型，是一种有效的新方法。

关键词： 单链标记 基因芯片 禽流感亚型 血凝素亚型 流感病毒 重组质粒 PCR方法

作者: 陶启蒙 王秀荣 武嘉男 石霖 李雁冰 包红梅 陈化兰

作者单位: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 农业部动物流感重点开放实验室/ 兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 308-310

在线出版日期: 2008-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）