以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒通用转移载体的构建及鉴定
禽痘病毒作为活载体已经得到广泛的应用，转移栽体的构建是重组禽痘病毒构建的重要环节。本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt，该载体含有gfp和gpt两个报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5，P11启动gfp和gpt两个基因，P7.5用于启动外源基因，在早期启动子P7.5下游引入NotⅠ和AflⅡ两个酶切位点，用于外源基因的插入。为检测禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt的效果，将H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到此载体构建了转移载体pSY681-gfp-gpt-HA，应用TransIT(R)-LT1 Transfection Reagent将此转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞，利用gfp和gpt同时进行双重筛选、数轮蚀斑纯化构建了重组病毒rFPV-gpt-gfp-HA9，通过PCR、Western blot鉴定，结果证明，获得了能稳定表达AIVHA蛋白的重组禽痘病毒r-FPV-gpt-gfp-HA9。
禽痘病毒 绿色荧光蛋白 HA基因 转移载体 AIVHA蛋白
王艳丽 李俊辉 姜永萍 夏俊 裴磊 冉多良 陈化兰
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室重点开放实验室，兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001；新疆农业大学动物医学院，新疆 乌鲁木齐 830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室重点开放实验室，兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001 新疆农业大学动物医学院，新疆 乌鲁木齐 830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室重点开放实验室，兽医生物技术国家重点实验室， 黑龙江 哈尔滨 150001
国内会议
中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会
北京
中文
42-45
2008-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）