抗克伦特罗单链抗体噬菌体展示文库的构建、初步筛选及鉴定

摘要：

目的：构建抗克伦特罗(CBL)单链抗体噬菌体展示文库(scFv phagedisplay libraries),从中筛选CBL特异性噬菌体单链抗体(phage scFv). 方法：提取经CBL免疫的小鼠的脾脏总RNA,RT-PCR扩增全套抗体轻链可变区(VL)及重链可变区(VH)基因,重叠延伸法将VL、VH片段拼接为单链抗体(scFv)基因片段.将scFv克隆到噬菌粒栽体pCANTAB5E中,转化感受态大肠杆菌TG1,用辅助噬苗体M13K07进行超感染,构建噬菌体单链抗体库.对抗体库进行亲合富集后,ELISA法筛选阳性克隆. 结果：扩增出抗CBL的VL、VH基因片段并拼接为全长的scFv,抗体库库容约为1.6 × 104,经4轮“吸附-洗脱-扩增”的富集,ELISA筛选到6个具有CBL结合活性的phage-scFv. 结论：成功构建抗CBL单链抗体噬菌体展示库,并初步筛选到具有CBL结合活性的噬菌体scFv,特异性好,为进一步大量表达CBL单链抗体奠定了基础.

关键词： 克伦特罗 单链抗体 噬菌体展示文库 食品安全

作者: 潘科 王弘 张宏斌 王捷 雷红涛 杨金易 孙远明

作者单位: 广东省教育厅食品质量安全重点实验室／华南农业大学食品质量安全研究所,广州 510640 广州军区广州总医院医学试验科,广州 510010

会议类型: 国内会议

会议名称: 第二届中国浙江学术节——食品安全监管与法制建设国际研讨会暨第二届中国食品研究生论坛

会议地点: 浙江绍兴

会议语种:中文

页码: 349-353

在线出版日期: 2005-11-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）