转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞系的建立

摘要：

参照GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因(AY55585和AH015065)设计并人工合成拟蜘蛛基因四聚体(4S)，与peDNA3.1载体(K2.10启动子)相连构建真核表达载体(pcDNA3.1-K2.10-4S)，采用脂质体介导法转染绵羊成纤维细胞，通过药物筛选、阳性细胞鉴定及体外培养等方法，获得了转蜘蛛拖丝蛋白基因的绵羊成纤维细胞系。结果，用pcDNA3.1-K2.10-4S表达载体转染冷冻复苏的绵羊成纤维细胞后，利用G418筛选法获得neo基因的抗性细胞，即阳性细胞；采用PCR方法对阳性细胞鉴定显示，所构建的载体整合到细胞基因组中;对阳性细胞的染色体核型分析显示，阳性细胞核型稳定，与正常细胞的核型无差异;阳性细胞经冷冻复苏后仍能保持原有的特性。该细胞系的建立为进一步开展转拟蜘蛛拖丝蛋白基因的克隆羊研究奠定了基础。

关键词： 拟蜘蛛拖丝蛋白基因 载体构建 绵羊 成纤维细胞

作者: 梁洋 王春生 原璐 安铁洙

作者单位: 东北林业大学生命科学学院,哈尔滨 150040

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会

会议地点: 陕西杨凌

会议语种:中文

页码: 197-200

在线出版日期: 2008-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）