重组人胰高血糖素样肽前药的表达、纯化及生物活性分析
目的：建立重组人胰高血糖素样肽前药(Prodrug of recombinant human GLPs，ProrhGLPs)的表达、纯化方法，研究Pro-rhGLPs对体内血糖水平及血清胰岛素水平的影响。 方法：采用IPTG(0.01 mmol·L-1)诱导原核表达系统E.coli BL21(DE3)/pET32a(+)-hGLPs表达Pro-rhGLPs，12％SDS-PAGE检测蛋白表达量，Ni-NTA亲和层析纯化Pro-rhGLPs，应用Western blot在体外观察前体药物的活性分子释放过程。在C57BL/6小鼠上进行葡萄糖耐量试验检测其生物学活性，不同时间间隔取血测定血糖及血清胰岛素水平。在糖尿病db/db小鼠上观察其降糖作用。 结果：所构建的Pro-rhGLPs原核表达系统中，Pro-rhGLPs表达量约为细菌总蛋白的50％。纯化得到的蛋白纯度达到95.43％，并且可以在特异性酶作用下缓慢降解，释放出多个GLP-1分子。纯化的Pro-rhGLPs呈剂量依赖性降低血糖浓度，同时升高血清胰岛素水平。等剂量Pro-rhGLPs的降糖作用较GLP-1作用更强。 结论：建立了Pro-rhGLPs高效表达、纯化方法，获得了高纯度Pro-rhGLPs，对糖尿病小鼠具有明显的降血糖作用。
人胰高血糖素样肽 重组蛋白 前体药物 生物活性 蛋白纯化
马雪 惠宏襄 周颖 何功浩 孟静茹 贾敏 罗晓星
第四军医大学药学系,陕西西安710032 美国加州大学医学部,加利福尼亚洛杉矶90048
国内会议
石家庄
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1-10
2008-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）