ERα调节剂高通量筛选模型的建立
目的：建立一个基于哺乳动物单杂交的报告基因的细胞瞬时转染的ER调节剂高通量筛选模型。 方法：利用RT-PCR技术从脂肪的总RNA中扩增Erα基因配体结合区(ligand bingding domain Erα LBD)序列,构建表达载体pBind-Erα的嵌合表达载体。与含GAL4相 应元件的报告质粒共转染细胞系,通过检测荧光素酶基因的表达状况评价化合物对Erα的调节活性。 结果：成功构建pBind-Erα表达质粒，并且通过报告质粒与表达质粒之间的比例和宿主细胞条件的优化,得到了最佳的共转染条件。在该模型上激动剂阳性药雌二醇能剂量依赖地提高荧光素酶的表达,最大上调倍增数超过25倍；拮抗剂阳性药它莫昔芬能有效地拮抗雌二醇的活性，最大拮抗活性可达8倍。此外该模型被微量化为384孔板。 结论：ER调节剂的筛选模型灵敏、稳定,可以快速进行多种来源的化合物药物的筛选。
ERα调节剂 高通量筛选 共转染条件 药物筛选 调节活性
张倩 郑智慧 路新华 范玉玲 水小溪 赵宝华 张华 贺建功
河北师范大学生命科学学院河北石家庄050016 华北制药集团新药开发有限责任公司河北石家庄050013
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2008-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）