阻断肝星状细胞内TGF-β1信号通路间“串话”，观察丹参酚酸B盐抗肝纤维化效应
(0) 目的：通过阻断肝星状细胞内TGF-β1信号通路间可能存在的“串话”，观察中药丹参的水溶性组分丹参酚酸B抗肝纤维化作用环节及其抗肝纤维化效应。 方法：首先利用RNAi技术抑制Smad信号通路的中枢蛋白Smad4表达，从而抑制人肝星状细胞株LX-2内Smad信号通路对p38和ERK信号通路间可能的“串话”。在此基础上，分别使用阻断剂抑制p38和ERK中的1条信号通路，用TGF-β1刺激细胞并加入丹参酚酸B(SA-B)温育，采用Western blot方法观察信号通路上关键激酶MEK、MKK3/6的磷酸化蛋白以及肝纤维化效应蛋白α-SMA抗体、Ⅰ型胶原蛋白的表达变化。 结果：⑴成功构建了Pol Ⅱ miR RNAi载体，经过筛选后Smad4干扰效率达到70.3％(P<0.01)。⑵TGF刺激LX-2的Smad信号通路可促进ERK通路中MEK蛋白激酶的磷酸化(P<0.001)，而对p38MAPK 通路上MKK3/6蛋白激酶的磷酸化似乎没有影响。⑶SA-B对LX-2 内TGF-β1的ERK信号通路上MEK蛋白激酶的磷酸化和p38MAPK信号通路上MKK3/6蛋白激酶的磷酸化有直接的抑制作用(P<0.01和P<0.001)。⑷ SA-B可通过抑制ERK通路或p38 MAPK通路，显著降低LX-2内α-SMA的表达(P<0.01和P<0.001)，和显著降低LX-2合成和分泌的Ⅰ胶原蛋白(P<0.05和P<0.01)。 结论：⑴应用RNA 干扰技术，成功构建了Smad4 Pol Ⅱ miR RNAi 载体，有效干扰Smad4的表达。⑵发现HSC内TGF-β1的Smad信号通路与p38通路不存在“串话”，而与ERK 通路存在“串话”；ERK通路和p38 通路之间无明显的“串话”现象。⑶SA-B分别直接抑制TGF-β1 在HSC内ERK通路和p38通路的信号传导；其作用环节分别是抑制MEK激酶和MKK3/6激酶的磷酸化。⑷通过抑制TGF-β1的信号传导，减少LX-2 活化，是SA-B“化”肝纤维化之“瘀”的关键。
肝纤维化 中药疗法 细胞调节 丹参药理
吕志刚 徐列明
上海中医药大学附属曙光医院;上海中医药大学肝病研究所201203
国内会议
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2008-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）