基因修饰的鸡新城疫病毒F48E9株HN基因DNA疫苗的构建及其免疫效力评价
DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系，为了提高目的基因的表达量，增强其免疫效果，本研究对NDV F48E9株的HN基因进行了修饰，将NDV F48E9株的HN基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子，同时在HN基因的5’端加上同样已替换密码子的禽流感病毒HA蛋白信号肽序列。修饰后HN基因命名为SoptiHN，剔除信号肽的HN基因命名为optiHN。将SoptiHN、optiHN和F48E9株的HN基因分别克隆到真核表达载体pVAX1和含有多个鸡体内最适免疫刺激序列CpG-ODN的载体pVAX1-CpG中，将他们分别命名为pV-SopliHN、pVC-SoptiHN、pV-optiHN、pVC-optiHN和pV-HN、pVC-HN，用这些质粒转染293T细胞，48h后间接免疫荧光和West-blotting检测细胞中瞬时表达的HN蛋白。结果显示，与未经修饰的HN基因相比，修饰后的HN基因体外瞬时表达水平明显提高，并且密码子优化与添加信号肽序列这两种途径都可以提高HN基因的体外表达量。将质粒pVAx1、pvAx1-CpG、pV-HN、pVC-HN、pV-Sop-tiHN和pVC-SoptiHN采用四头肌多点注射三周龄SPF鸡，每只鸡200μg，PBS设为空对照组；一免后三周以相同的剂量加强免疫，二免后以103 EID50 NDV的F48E9强毒株进行攻毒，计算发病率、死亡率、以及排毒情况。免疫前后，及攻毒前后每周采集血清和外周血淋巴计算Ⅷ抗体和细胞因子IFN-γ和IL-18动态变化情况。分析结果表明，相比NDV F48E9马株的HN基因而言，修饰后的HN基因可以诱导更加强烈的免疫反应，产生更好的保护效率。
鸡 新城疫病毒 DNA疫苗 密码子优化 信号肽 免疫印迹
贺笋 王云峰 木古丽 石星明 王玫 童光志
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室 哈尔滨 150001;新疆农业大学动物医学学院 乌鲁木齐 830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室 哈尔滨 150001
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2007-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）