会议专题

小发夹RNA体外抑制HBV表面抗原的表达

目的:利用载体系统表达小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA),诱导RNA干扰(RNAinterference,RNAi)为抗病毒研究提供一种新的方法。 方法:构建含乙肝表面抗原和绿荧光蛋白(HBs-GFP)融合基因的载体和表达小发夹RNA(shRNA)的载体,共转染到HepG2细胞中,流式细胞仪检测融合基因的绿荧光表达情况,同时用荧光定量RT-PCR检测其RNA水平的改变;选择有效的shRNA表达载体,转染HepG2.2.15细胞系。放射免疫法检测上清中HBsAg和HbeAg的分泌情况。 结果:流式细胞仪检测发现针对HBsAg的shRNA抑制绿荧光蛋白的表达,抑制率较空载体对照组下降56%,荧光定量RT-PCR检测结果显示,其mRNA水平降低明显,抑制率较空载体下降90%。转染HepG2.2.15细胞系后,HBsAg and HBeAg分别下降了43%and 64%。 结论:小发夹RNA可以有效抑制HBVS基因的表达,同时建立一种可行的筛选RNAi作用靶位的方法。

抗病毒活性 乙型肝炎 表面抗原 绿荧光蛋白 融合基因 基因表达

羊正纲 陈智 倪勤 徐宁 邵俊斌 姚航平

浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所,浙江省杭州市,中国

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330-337

2004-10-01(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)