rLTB/rCTB-rOmpL1/1的免疫原性和佐剂活性及问号钩端螺旋体野生株ompL1基因表达和病人血清特异抗体的检测
目的：构建ltB/ctB-ompL1/1融合基因及其原核表达系统，鉴定表达产物的免疫和佐剂活性，检测问号钩端螺旋体(简称钩体)野生株ompL1基因的携带、表达情况和钩体病人血清特异性抗体。 方法：采用连接引物PCR构建ltB-ompL1/1和ctB-ompL1/1融合基因，常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1表达情况。采用Western Blot和GM1-ELISA分别检测上述目的重组蛋白的免疫原性和佐剂活性。采用PCR和MAT分别检测97株问号钩体野生株ompL1基因及其表达情况。采用ELISA检测228例钩体病人血清ompL1基因产物的抗体。 结果：与报道的相关序列比较，ltB-ompL1/1和ctB-ompL1/1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.7％-99.9％和99.5％-100％。rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1表达产量均约为细菌总蛋白的10％，主要以包涵体形式存在。rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1均分别能与rOmpL1/1兔抗血清和牛GM1结合。89.7％(87/97)问号钩体野生株含有ompL1基因，87.6％(85/97)问号钩体野生株分别与rOmpL1/1和rOmpL1/2兔抗血清出现效价范围为1：4～1：256的MAT阳性结果。86.8％(198/228)和88.6％(202/228)的病人血清标本分别rOmpL1/1和rOmpL1/2抗体阳性。 结论：本文成功地构建了ltB-ompL1/1和ctB-ompL1/1融合基因及其原核表达系统。所表达的rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1融合蛋白有良好的免疫原性和佐剂活性。ompL1是不同问号钩体血清群中广泛存在和高频率表达的基因，且其不同基因型的表达产物有广泛的抗原和抗体交叉。rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1具有成为问号钩体属特异性疫苗抗原的良好前景。
问号钩端螺旋体 大肠埃希菌 霍乱弧菌 融合基因 免疫原性 佐剂活性 基因表达 特异性疫苗
阮萍 严杰 毛亚飞 李淑萍 罗依惠 李立伟
绍兴文理学院医学院,浙江 绍兴 312000;浙江大学医学院病原生物学教研室,浙江 杭州 310031
国内会议
杭州
中文
225-232
2004-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）