GFP标记LC-1 ScFv的克隆、表达、纯化和功能分析
从分泌抗肺腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株(LC-1)抽提总RNA，反转录成cDNA；根据LC-1抗体基因的FR1和FR4保守区设计引物，PCR扩增出重链和轻链的可变区部分，重叠延伸PCR法将重链基因与修饰后的轻链基因连接，构建成LC-1单链抗体(single chain Fv，ScFv)；改造后的ScFv与绿色荧光蛋白(GreenFluorescent Protein，GFP)基因连接，克隆到pProEx HTb，构建成表达质粒ProGFP-ScFv，并转化大肠杆菌JM109。IPTG诱导表达的融合蛋白在10％SDS-PAGE表现为70 KD的条带，主要以包涵体形式存在。Ni-NTA树脂纯化复性后的融合蛋白，ELISA检测表明该蛋白具有SPC-A-1肺腺癌细胞表面抗原结合活性；诱导后菌液在395 nm光波下显示出较强的绿色荧光，表明目的基因在原核系统中表达出具有双重活性的目的蛋白。 含GFP标签的ScFv可作为一种免疫染色的新型检测试剂，并提供了一种可行的临床上检测肺腺癌细胞的方法。
单链抗体 绿色荧光蛋白标签 融合表达 单克隆抗体 肺腺癌 免疫染色
龚兴国 卢敏 于红
浙江大学生命科学学院,生物大分子与酶工程研究所,杭州 310027
国内会议
杭州
中文
98-105
2004-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）