人OSM转基因细胞的建立及其对脐带血CD34+造血干/祖细胞体外扩增的影响
目的:构建稳定表达抑瘤素M(OSM)基因的人胚肾成纤维细胞(293T细胞),将其作为饲层细胞,研究其对脐带血造血干/祖细胞体外扩增的作用。 方法:将重组逆转录病毒载体pEGZ/MCS-HA-OSM采用脂质体法转入293T细胞,通过zeocin加压筛选建立稳定的转基因细胞系,并采用RT-PCR方法和ELISA方法检测OSM表达水平.然后将构建好的转基因细胞作为饲养层,与免疫磁珠法分选的脐带血CD34+细胞共培养,观察培养后CD34+细胞的百分比,数量以及细胞表面标志CD54,CXCR4的表达.实验中应用空质粒载体组和293T细胞纽作为对照. 结果:RT-PCR和ELISA结果表明逆转录病毒载体介导的OSM基因在293T细胞中表达.应用OSM基因修饰的饲养层细胞培养7天后,CD34+细胞绝对数较培养前扩增了9.4倍,同时OSM基因修饰的饲养层细胞还可以减缓细胞表面标志CD54,CXCR4下降程度,提示OSM有助于保持脐带血造血干/祖细胞的归巢力. 结论:建立了稳定表达OSM的转基因细胞系,将其作为饲养层细胞可改善脐带血造血干/祖细胞体外培养的微环境,有助于保持其多能性和未分化性。
抑瘤素M基因 饲养层 重组逆转录病毒载体 造血干细胞 祖细胞 体外扩增 OSM表达
胡志清 井莹莹 盛伟华 刘铁连 单云波 杨吉成 张日 朱南康 缪竞诚
苏州大学医学部 细胞与分子生物学教研室 江苏苏州 215123 苏州大学附属第一医院 血液科 江苏苏州 215006 苏州大学放射医学研究所 江苏苏州 215007
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2008-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）