rhIFN-Epsilon在大肠杆菌中的高效表达和纯化
目的:构建人干扰素Epsilon(hlFN-ε)蛋白重组质粒并在BL21大肠杆菌中表达,经纯化获得高纯度的产物,为研究其生物活性和功能奠定基础。 方法:采用PCR方法从重组质粒pcDNA3.1A-hIFN-ε中扩增出人1FN-ε基因片段,定位克隆入pET30a(+)中;重组表达载体pET30a-6his-hIFN-F转化BL21,经PCR、酶切和测序鉴定后,将不同时间诱导的表达产物进行SDS-PAGE凝胶电泳分析,确定最佳诱导时间,表达产物经Ni-TA亲和层析纯化。 结果:已成功构建了重组原核表达质粒pET30a-6his-hIFN-ε,在0.5mmol/LIPTG下诱导7h左右目的蛋白在大肠杆菌中表达量最高,并以包涵体形式呈现,占总菌体蛋白的37.1％,经亲和层析纯化,获得了纯度达到95.1％左右的rhIFN-Epsilon蛋白。 结论:rhIFN-Epsilon在大肠杆菌中获得了高效表达,并获得了高纯度的rhIFN-ε蛋白产物。
干扰素Ⅰ型 蛋白重组质粒 包涵体 大肠杆菌 基因表达 分离纯化
单云波 盛伟华 谢宇锋 杨吉成
苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室 215123
国内会议
吉林省吉林市
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45-47
2008-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）