PRRSV-PCV重组病毒的构建及PRRSV转录调控机制研究
为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性cDNA克隆作为外源基因表达载体的可行性以及利用重组病毒对PRRSV复制转录过程进行分析.以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,在pAPRRS的ORF1和ORF2间插入猪圆环病毒(PCV2)的主要免疫原开放阅读框架(ORF),构建了全长嵌合cDNA克隆pCPV,随后进行了病毒拯救及对拯救病毒vCPV复制转录分析.结果发现:vCPV的sgmRNA2.1盗用了PRRSVsgmRNA2的转录调控序列(TRS),形成由PRRSV GP2和PCV2衣壳蛋白组成的sgmRNA2.1.令人吃惊的是,外源基因的插入同时也导致重组病毒启用新的TRS而产生三条新亚基因组,其中sgmRNA2.2、sgmRNA2.3和sgmRNA2.4采用PCV中序列作为启动子;另一条sgmRNA2.5则为非经典型亚基因组,其TRS与PRRSV ORF2的起始密码子(AUG)间隔19、37、97个碱基,在AUG下游.本研究结果表明:1两株重组PRRSV-PCV2病毒可以稳定传代,为进一步研发PRRSV遗传标识疫苗奠定了基础;2)插入片断上一些TRS样序列引入及插入过长片断(718bp)导致PRRSV本身TRS的RNA结构变化是引起重组病毒遗传不稳定性最主要原因;3)PRRSV可以利用TRS样外源序列作为转录启动子,为进一步解剖PRRSV复制转录过程奠定了基础.
PRRSV 转录调控序列 猪圆环病毒 表达载体 重组病毒
郑海红 孙志 朱兴全 袁世山
中国农业科学院上海兽医研究所 动物传染病研究室 农业部动物寄生虫病重点实验室 上海 200232 华南农业大学兽医学院 广东 广州 510642 中国农业科学院上海兽医研究所 动物传染病研究室 农业部动物寄生虫病重点实验室 上海 200232 华南农业大学兽医学院 广东 广州 510642
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189-195
2008-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）